АНГИОГЕНИН в хирургии

ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ АНГИОСТИМУЛИРУЮЩИХ ТЕХНОЛОГИЙ В ХИРУРГИИ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ
АНГИОСТИМУЛИРУЮЩИХ ТЕХНОЛОГИЙ В ХИРУРГИИ
К.К. Токтомбаев — канд. мед. наук, А.Х. Габитов — канд. мед. наук, Томский военно-медицинский институт Приведены данные морфологической оценки лечебного воздействия препарата «рек-ангиогенин» на модели экспериментальной кожной раны.   Введение. Любая хирургическая операция всегда должна предусматривать сохранность или восстановление полноценного кровоснабжения зоны поражения и чем быстрее это происходит, тем благоприятнее протекает послеоперационный период, снижается процент осложнений. Как известно, образование кровеносных сосудов определяется васкулогенезом и ангиогенезом. Ангиогенез включает в себя пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток в первичных васкулярных структурах и способствует васкуляризации эктодермальных и мезенхимных органов, реконструкции капиллярной сети [1]. Молекула ангиогенина (АНГ) по своей структуре и функции уникальна. Это рибонуклеаза, по аминокислотной последовательности на 33% гомологичная последовательности бычьей панкреатической РНКазы А [2]. Каталитические характеристики АНГ и РНКазы близки. Однако рибонуклеазная активность АНГ по отношению к обычно используемым субстратам на несколько порядков ниже, чем активность РНКазы. В последние годы активно разрабатывается принципиально новая концепция коррекции артериальной недостаточности при поражении различных сосудистых бассейнов – терапевтический ангиогенез (therapeutic angiogenesis) [1, 3, 4]. С точки зрения концепции “терапевтического ангиогенеза”, большой интерес представляет белок – ангиогенин [5]. Он относится к группе ангиогенных белков, которые стимулируют рост кровеносных сосудов, представляет собой основной белок, состоящий из 123 аминокислот, молекулярной массой 14 кД, и имеющий высокую степень гомологии с рибонуклеазой А. Хотя в настоящее время биологическая роль ангиогенина окончательно не ясна, интерес к нему весьма значителен прежде всего из-за перспективы создания на его основе эффективных препаратов для лечения ран, язв и ожогов [6, 7]. В ЗАО “Саяны” разработана оригинальная биотехнология получения модифицированного ангиогенина человека – препарат “рек-ангиогенин”. Методы современной биотехнологии позволили ЗАО “Саяны” наработать рек-ангиогенин в препаративных количествах. Цель исследования: дать экспериментальное обоснование эффективности препарата “рек-ангиогенин”. (Авторы выражают благодарность руководителю ЗАО “Саяны” Ю.А. Рамазанову за предоставление препарата рек-ангиогенина для проведения доклинических и клинических испытаний). Материал и методы. В работе использовано 180 лабораторных крыс обоего пола. Все манипуляции на животных проводили под эфирным наркозом. Животных содержали в клетках при температуре 18–22°С и 24-часовом световом режиме (12 ч – свет, 12 ч – темнота). Крысы получали ad libitum, сбалансированный по белкам и углеводам, витаминизированный стандартный кормовой рацион. Доступ к воде и пище был свободным. Материалом для исследования послужили мягкие ткани в норме и после создания модели асептической раны кожи с подкожной жировой клетчаткой до 5 см, в последующем рана ушивалась только по краю разреза кожи. В первой группе опытов (контроль) происходило спонтанное приживление. Во второй группе (основная) перед ушиванием хирургической раны межфасциальное пространство обрабатывалось препаратом рек-ангиогенин. Оценка состояния процессов заживления раны и эффективности лечения проводилась до 45 суток. С целью оценки репаративного процесса и для объективного контроля за процессами заживления ран мягкие ткани области хирургической раны исследовались общепринятыми макромикроскопическими, гистологическими и морфометрическими методами. Морфометрия тканевых структур проводилась при помощи окулярмикрометра МОВ-1-15х на светооптических микроскопах “Люмам-I-2”, МБИ-15 в соответствии с общепринятыми требованиями [8, 9]. Характеристика морфофункционального состояния прилежащих мягких тканей складывалась из суммарной оценки признаков, наблюдаемых при визуальном изучении гистологических препаратов и количественных методов исследования. Результаты исследований. При инъекции кровеносного русла отмечено, что в процессе спонтанного заживления в зоне повреждения на 7-й день функционирующие сосуды еще отсутствуют, тогда как после применения рек-ангиогенина у животных они начинают появляться уже через 24 ч, а к третьему дню хорошо видна формирующаяся сосудистая сеть. Морфометрический анализ показал (см.таблицу), что у животных при спонтанном заживлении и применении рек-ангиогенина сравнительная морфологическая характеристика регенераторного процесса однонаправленная, но с существенным клеточным различием. Это проявляется в увеличении пролиферативной активности фибробластов, ускоряется посттравматическое развитие лейкоцитарной и макрофагической реакции, а также формирование грануляционной ткани. Начиная с трех суток, объем коллагеновых волокон в опыте превышает таковой в контроле. На 7-е сутки наблюдения отмечается лучший гистоархитектурный порядок, лучшая васкуляризация и отсутствие клеток воспаления на уровне прилежащих мышц. Это приводит к ускорению новообразования грануляционной ткани и, в первую очередь, микрососудов, а также образованию регенерата, по морфологии приближающегося к нормальной картине. При изучении цитологической картины во второй и третьей фазах раневого процесса у животных, которым проводилось лечение рек-ангиогенином, начиная с 7 суток отмечено более раннее появление коллагеновых волокон только в зоне повреждения. В центре раны просматривалась продольная ориентация коллагеновых пучков, чем регенерат напоминал рубец. Воспалительная инфильтрация несколько снизилась по сравнению с аналогичной группой без применения препарата. К 14-м суткам отмечалась выраженная пролиферация фибробластов и формирование сосудистой сети. После применения рек-ангиогенина значительно быстрее, чем при спонтанном заживлении, происходит эпителизация поверхности раны. В глубоких слоях зоны повреждения визуально наблюдалась различная гистологическая картина в двух группах с четким нарастанием разницы к концу первого месяца.